黃曲霉素及其檢測(cè)方法綜合介紹
黃曲霉毒素(aflatoxin，簡(jiǎn)稱為AF)是到目前為止所發(fā)現(xiàn)的毒性最大的真菌毒素。它可通過(guò)多種途徑污染食品和飼料，直接或間接進(jìn)入人類食物鏈，威脅人類健康和生命安全，對(duì)人體及動(dòng)物內(nèi)臟器官尤其是肝臟損害嚴(yán)重，該毒素是黃曲霉和寄生曲霉中產(chǎn)毒菌株的代謝產(chǎn)物，普遍存在于霉變的糧食及糧食制品中。黃曲霉毒素十分耐熱，加熱至230℃才能被完全破壞，因此一般烹飪加工也不易消除。
二、黃曲霉毒素對(duì)人體的危害
1、引起急、慢性中毒：
黃曲霉毒素是劇毒物質(zhì)，其毒性相當(dāng)于氰化鉀的10倍，砒霜的68倍。黃曲霉毒素屬肝臟毒，除抑制DNA、RNA的合成外，也抑制肝臟蛋白質(zhì)的合成，黃曲霉毒索引起人類的急性中毒事件，國(guó)內(nèi)外均有許多報(bào)導(dǎo)，最典型的是印度的霉變玉米事件，該事件直接導(dǎo)致了數(shù)十人喪生，數(shù)百人患上不同類型的肝臟疾病。
2、致癌性：
黃曲霉毒素有極強(qiáng)的致癌性，長(zhǎng)期攝入黃曲霉毒素會(huì)誘發(fā)肝癌。它誘發(fā)肝癌的能力比二甲基亞硝胺大75倍，是目前公認(rèn)的致癌性最強(qiáng)的物質(zhì)之一。另?yè)?jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)導(dǎo)，黃曲霉毒素含量在30?50ug/kg時(shí)為低毒，50?100ug/kg時(shí)為中毒，100?1000ug/kg時(shí)為高毒，1000ug/kg以上為極毒。鑒于黃曲霉毒素對(duì)人類的巨大危害性，我國(guó)對(duì)其在食品中的含量作了嚴(yán)格規(guī)定，其中，乳制品中黃曲霉毒素最高允許量為5ug/kg（即5ppb）。
三、黃曲霉毒素的種類
黃曲霉毒素主要有4種：即B1、B2、C1、G2，其中B1被認(rèn)為是主要的有毒物質(zhì)，有2種這些毒素的代謝產(chǎn)物M1和M2。其中黃曲霉毒素B1主要存在于農(nóng)產(chǎn)品，動(dòng)物飼料，中藥等產(chǎn)品中；黃曲霉毒素M1是動(dòng)物攝入黃曲霉毒素B1后在體內(nèi)經(jīng)羥基化代謝的產(chǎn)物，一部分從尿和乳汁排出，一部分存在于動(dòng)物的可食部分，如乳、肝、蛋類、腎、血和肌肉中，其中以乳最為常見(jiàn)。黃曲霉毒素M1的毒性和致癌性與黃曲霉毒素B1的基本相似。由于牛乳及其制品是人類、特別是嬰兒的主要食品，所以其危害性更大。
四、最新政策及國(guó)標(biāo)（含國(guó)外一些政策）
1、自2003年8月1日起，凡在我國(guó)境內(nèi)從事米、面、油、醬油、醋生產(chǎn)加工的企業(yè)，其產(chǎn)品須經(jīng)檢驗(yàn)合格后方可上市。國(guó)家質(zhì)檢總局發(fā)布的《關(guān)于印發(fā)小麥粉等5類食品生產(chǎn)許可證實(shí)施細(xì)則的通知》中明確規(guī)定，黃曲霉毒素B1必須檢測(cè)。
2、在第八期《中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局公報(bào)》中發(fā)布關(guān)于黃曲霉毒素檢測(cè)方法的最新國(guó)標(biāo)：
（1）、GB/T 18979-2003 《食品中黃曲霉毒素的測(cè)定??免疫親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》
（2）、GB/T 18980-2003 《乳和乳粉中黃曲霉毒素M1的測(cè)定??免疫親和層凈化高效液相色譜法和熒光光度法》
以上兩項(xiàng)國(guó)標(biāo)均在2003年8月1日開(kāi)始實(shí)施
3、2002年2月4日歐盟決議對(duì)從中國(guó)進(jìn)口或委托從中國(guó)進(jìn)口的花生和花生制品實(shí)施黃曲霉毒素強(qiáng)制性檢測(cè)的特殊條件
五、中國(guó)及國(guó)際上對(duì)黃曲霉毒素的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
1、主要國(guó)家：
品名中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)歐盟
玉米、花生、花生油，堅(jiān)果和干果（核桃、杏仁）≤20μg/kg (ppb)≤20μg/kg
(ppb)≤2、4、5、8、10、15μg/kg (ppb)
玉米及花生仁制品（按原料折算）≤20 μg/kg (ppb)≤20μg/kg (ppb)≤2、4、5、8、10、15μg/kg
(ppb)
大米、其它食用油（香油、菜子油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、麻油、玉米胚芽油、米糠油、棉籽油）≤10 μg/kg
(ppb)≤10μg/kg (ppb)≤2、4μg/kg (ppb)
其它糧食（麥類、面粉、薯干）、發(fā)酵食品（醬油、食用醋、豆豉、腐乳制品）、淀粉類制品（糕點(diǎn)、餅干、面包、裱花蛋糕）≤5μg/kg
(ppb)≤5μg/kg (ppb)不得檢出
牛乳及其制品（消毒牛乳、新鮮生牛乳、全脂牛奶粉、淡煉乳、甜煉乳、奶油）、黃油、新鮮豬組織（肝、腎、血、瘦肉）≤0.5μg/kg
(ppb)≤0.5μg/kg (ppb)≤0.05μg/kg (ppb)
2、其他
(1)、WHO／FAO標(biāo)準(zhǔn)。國(guó)際衛(wèi)生組織(WHO)／世界糧農(nóng)組織所屬的食品法典委員會(huì)(CAC)推薦食品、飼料中黃曲霉毒素最大允許量標(biāo)準(zhǔn)為總量(B1+B2+G1+G2)小于15μg／kg；牛奶中M1的最大允許量為0．5μg／kg
(2)、南非標(biāo)準(zhǔn)。1990頒布了黃曲霉毒素的最大允許標(biāo)準(zhǔn)：食品中黃曲霉毒素總量小于10μg／kg，其中黃曲霉毒素B1小于5μg／kg。
(3)、其他標(biāo)準(zhǔn)。印度標(biāo)準(zhǔn)是花生中黃曲霉毒素B1小于30μg／kg；越南和阿根廷的標(biāo)準(zhǔn)為黃曲霉毒素B1小于20μg／kg。
六、黃曲霉毒素檢測(cè)方法
測(cè)定黃曲霉毒素M1的方法有薄層色譜法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法、質(zhì)譜法、放射免疫測(cè)定法。這些方法或多或少都具有如下不足之處：
（1）、在操作過(guò)程中，需要使用劇毒的黃曲霉毒素M1作為標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)物，對(duì)操作人員造成巨大的沾污危險(xiǎn)，而且黃曲霉毒素M1標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)購(gòu)買十分困難。
（2）、操作過(guò)程煩瑣、復(fù)雜、時(shí)間長(zhǎng)，勞動(dòng)強(qiáng)度大。
（3）、儀器設(shè)備昂貴、笨重、操作復(fù)雜，難以實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速分析。
（4）、靈敏度較差，重復(fù)性很難得到滿意結(jié)果。
在上面第四項(xiàng)中提到的最新國(guó)標(biāo)方法“免疫親和柱法”較好的解決了上面的不足，該種方法可以采用配套的熒光儀進(jìn)行檢測(cè)，也可以和高效液相色譜法結(jié)合，解決標(biāo)準(zhǔn)物污染和操作過(guò)程繁復(fù)等問(wèn)題。同時(shí)該種方法有著較好的權(quán)威性和通用性，且為國(guó)外多個(gè)組織認(rèn)可，被列為標(biāo)準(zhǔn)方法，如：
美國(guó)公職分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）
美國(guó)農(nóng)業(yè)部聯(lián)邦谷物檢測(cè)中心（FGIS）
國(guó)際純粹與應(yīng)用化學(xué)協(xié)會(huì)（IUPAC）
美國(guó)食品藥品行政署（US-FDA）
美國(guó)農(nóng)業(yè)部（USDA）
同時(shí)在國(guó)內(nèi)被認(rèn)證的機(jī)構(gòu)：
中國(guó)出入境檢驗(yàn)檢疫局（CIQ）
中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB）
七、黃曲霉毒素檢測(cè)??“免疫親和柱法”方法簡(jiǎn)介
為了開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單、快速、靈敏、準(zhǔn)確的分析方法,美國(guó)VICAM(維康)公司與哈佛大學(xué)、麻省理工學(xué)院、約翰－霍普金斯大學(xué)、AOAC、FDA、FGIS、美國(guó)農(nóng)業(yè)部等著名大學(xué)和政府機(jī)構(gòu)通力合作，發(fā)明研制了一系列以單克隆免疫親和柱為分離手段，用熒光計(jì)、紫外燈作為檢測(cè)工具的分析方法。該項(xiàng)技術(shù)有一下特點(diǎn)：
1、認(rèn)證機(jī)構(gòu)廣泛，通用性強(qiáng)（見(jiàn)第六項(xiàng)）
2、分析速度快，一個(gè)樣品只需10－15分鐘，其他傳統(tǒng)的方法要做到定量分析需要幾小時(shí)至幾天的時(shí)間。
3、靈敏度高，測(cè)定范圍廣泛（0－300ppb）,用熒光計(jì)可以測(cè)定0.1ppb的黃曲霉毒素M1，用HPLC可以檢測(cè)出10ppt的黃曲霉毒素M1。
4、采用單克隆免疫技術(shù)，可以特效性地將黃曲霉毒素和其他真菌毒素分離出來(lái)，分離效率和回收率高，正確性和可靠性強(qiáng)。
5、儀器輕便容易攜帶，自動(dòng)化程度高，操作簡(jiǎn)單，直接讀出測(cè)試結(jié)果，對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員要求不高，可以在小型實(shí)驗(yàn)場(chǎng)所使用。
6、不需要?jiǎng)《镜狞S曲霉毒素和其他真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)物來(lái)標(biāo)定，所以在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，絕對(duì)安全可靠。
八、可以測(cè)試的其他真菌毒素
該中方法適用廣泛，利用同一臺(tái)儀器和相似的分析方法還可檢測(cè)出赭曲霉毒素，伏馬毒素、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和T-2毒素等。
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